胰島素ELISA試劑盒是一種基于夾心法原理的固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔涂有單克隆抗體，可與胰島素分子上*的抗原位點結合。將含有內源性胰島素的患者樣本與生物素標記的抗胰島素抗體酶復合物在包切孔中孵育。
孵育后，用洗滌液洗滌未結合的酶復合物。二次升溫時，鏈親和過氧化物酶復合物與生物素抗胰島素抗體結合，結合量與樣品中胰島素濃度成正比。顯示的顏色強度與添加底物后患者樣本中胰島素的濃度成正比。
大鼠胰島素ELISA試劑盒的使用方法如下：
實驗前，所有試劑應平衡至室溫，試劑不能直接溶解于37。配制試劑或樣品時，應充分混合，混合時應避免氣泡。實驗前，應預測樣品含量。如果樣品濃度過高，應稀釋樣品，使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍。計算時，應乘以相應的稀釋倍數。
1、加樣：分別設置空白孔、標準孔和待測樣品孔。向空白孔中加入樣品稀釋劑100，分別加入標準品或待測樣品100。注意不要有氣泡。加入樣品時，將樣品加入酶標板底部，盡量不要碰到孔壁，輕輕搖勻。在酶標板上加蓋或膜，37℃保存2小時。為保證實驗結果的有效性，請每次實驗使用新的標準溶液。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100（臨用前配制），酶標板加上覆膜，37溫育1小時。
3、棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
4、每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時。
5、棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、向每個孔、酶標板和37號包衣中加入90底物溶液，避免出現淺色（反應時間控制在15-30分鐘，當標準孔的前3-4個孔有明顯的藍色梯度，后3-4個孔的藍色梯度不明顯時終止反應）。
7、每孔加終止溶液50，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
8、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（值）。
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